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Les Gardiens du Patrimoine Cellulaire

La culture cellulaire : un service angulaire à la source de notre cœur de métier.

Les 7 collaborateurs qui composent ce service sont les gardiens d’un patrimoine cellulaire riche et unique, un patrimoine de clones nous garantissant une complète autonomie en matière de production d’anticorps monoclonaux pour l’Immuno-hématologie. Leur rôle est prépondérant, exige une rigueur et un professionnalisme sans faille et réclame un suivi de tous les instants dans tous les stades de la production : les clones méritent toute l’attention même les week-ends et les jours fériés !

Le principe de la culture cellulaire

Les clones créés et entretenus par le service de culture cellulaire, ont été obtenus entre 1985 et 1991 via l’utilisation de 2 techniques :

• la technique des ascites où les anticorps sont produits par tumeur intrapéritonéale provoquée chez la souris ou le rat (technique délaissée depuis quelques années),
• la technique de fusion d’un lymphocyte B (provenant d’une souris préalablement immunisée contre un antigène donné) et d’une cellule de myélome (cellule provenant d’une lignée cancéreuse inactivée)

Le lymphocyte produisant des anticorps et le myélome de souris se multipliant à l’infini, la fusion d’un lymphocyte d’homme (ou de souris) et d’ un myélome de souris donne une cellule hybride (ou hybridome) qui récupère les 2 particularités :

• elle va donc secréter un anticorps monoclonal en grande quantité,
• tout en se multipliant indéfiniment tant que des conditions appropriées (température, pH, nutriments, oxygène) et des éléments nutritifs strictement choisis lui sont fournis.

Les procédés de fabrication

Cette lignée cellulaire est stockée dans l’azote (-196°C) sous forme d’ampoule. C’est la banque cellulaire. A partir de ces ampoules, le procédé de production qui dure de 1 à 4 mois, va permettre la production de grandes quantités d’anticorps monoclonaux.

1. Décongélation d’une ampoule et amplification en rollers
   Une ampoule de la banque est décongelée puis amplifiée (multiplication cellulaire) en roller pendant environ 3 semaines afin d’atteindre la concentration cellulaire souhaitée.
2. Culture cellulaire en cytoculteur ou en roller
   Si la quantité planifiée n’excède pas 80 litres, tout le processus de culture reste en technique « Roller ». Sinon, au bout des 3 semaines, nous préparons l’inoculum sous hotte à flux laminaire, préparation d’une biomasse suffisante avant le transfert dans le bioréacteur. Ces opérations se déroulent en zone ISO 7 et sont effectuées dans des conditions stériles avec les paramètres suivants parfaitement régulés : le pH (milieu tamponné + régulation par CO2), la température (37 ° C), l’oxygène, le niveau à l’intérieur et l’’agitation. A l’issue de cette étape nous récoltons des poches de surnageant stérile qui doivent être traitées.
3. Clarification par filtration frontale
   Élimination des cellules, en utilisant un filtre 0,22 μ.
4. Concentration par filtration tangentielle (fibre creuse)
   Augmentation de la performance du produit et diminution des volumes de stockage.
5. Dialyse
   Amélioration des conditions de conservation et d’activité.
6. Les contrôles in process
   L’activité et la spécificité de chaque anticorps sont alors testées ainsi que le pH, l’osmolarité et le taux de protéines et peuvent être ajustés.
7. Le stockage long terme
   les concentrés ainsi préparés sont stockés en chambres froides à 4°C (2 ans de stabilité) ou -30°C (4 ans de stabilité) selon leur calendrier d’utilisation. Ce sont nos stocks de principes actifs qui serviront ensuite pour les produits de nos différentes gammes.

Les chiffres-clés